HIV-testi, kutsutaan usein myös "AIDS-testiksi"
Ensimmäinen käytetty testi oli infektiotautien diagnostiikassa
käytetty antigeeni-vasta-ainereaktioihin perustuva määritysmenetelmä
(ELISA). Testi selvittää, sisältääkö
henkilön veri vasta-aineita AIDS-virus HIV:hen. Testillä
ei pystytä löytämään virusta itseään
tai virusnukleiinihappoa, vaan ainoastaan ne vasta-aineet
ja erityiset proteiinit, jotka tartunnan saaneen henkilön
immuunijärjestelmä kehittää taistellakseen
virusta vastaan. Jos nämä vasta-aineet löytyvät,
testi on "positiivinen". Tässä tapauksessa
ELISA toistetaan, jotta testin tuloksista voidaan olla varmoja.
Jos toinen ELISA-testi on niin ikään positiivinen,
suoritetaan toinen tarkempi testi, joka tunnetaan Western
blot-tunnistusmenetelmänä. Jos tämäkin
testi on positiivinen, toinen verinäyte testataan Western
blot-analyysillä. Vain jos kaikki nämä testit
ovat positiivisia, henkilön todetaan olevan "HIV-positiivinen".
Väärät positiiviset testitulokset ovat äärimmäisen
harvinaisia (noin 1/20 000 suoritetusta testistä).
Koska immuunijärjestelmä vaatii aikaa sellaisten
suurten vasta-ainemäärien muodostamiseen, jotka
tarvitaan testituloksen löytämiseksi, testi ei onnistu
heti tartunnan jälkeen. Tartunnan jälkeen virukselta
menee noin 6-12 viikkoa riittävän vasta-ainemäärän
muodostamiseen, jotta testi voidaan suorittaa. Siksi saattaa
olla, että HIV-tartunnan saaneelta henkilöltä
tänä aikana otettu testi on negatiivinen. Tätä
kutsutaan vääräksi negatiiviseksi tulokseksi.
HIV-tartunta voidaan löytää aikaisemmassa
vaiheessa vain potilaan veren virusnukleiinihapon suoralla
mittauksella (ks. "viruspitoisuus"). Nämä
testit ovat kuitenkin huomattavasti kalliimpia, eikä
niitä käytetä rutiininomaisessa seulonnassa.
Kuinka nykypäivän antiviraaliset lääkkeet
on kehitetty?
Nykpäivän lääketutkimuksessa ei tutkita
sattumanomaisesti, mikä lääkkeistä saattaisi
olla tehokkain, vaan tutkijat tutkivat taudin molekyylimekanismia
ja yrittävät sitä kautta löytää
lupaavia maalitauluja lääkkeelle.
Perustutkimus voi olla tässä erittäin tärkeää:
esim. tutkijoiden etsiessä syytä AIDS:iin - joka
oli retrovirus nimeltä HIV - heitä auttoi huomattavasti
se seikka, että retroviruksista ja niiden ominaisuuksista
tiedettiin jo yleisesti paljon.
HI-viruksen tunnistamisen jälkeen tutkijat oppivat paljon
sen yksityiskohtaisesta ulkomuodosta sekä siinä
olevista komponenteista ja niiden roolista ihmissolussa viruksen
elinkaaren aikana. Sekä viruksen tunnistamisessa että
sen molekyylirakenteen ja toiminnan tutkimuksessa käytettiin
monia nykypäivän bioteknologian ja geeniteknologian
perustoimenpiteitä. Virusta tutkittiin suoraan elektronimikroskopian
avulla, sen genomi sekvensoitiin ja kaikki sen proteiinit
luonnehdittiin ja toiminnot tunnistettiin. Ja lopuksi, kun
eri maiden tutkijat olivat keränneet kaikki nämä
tiedot, alettiin HI-virusta ja sen mekanismeja ihmissolun
elinkaaressa ymmärtämään paremmin.
Teoreettisesti viruksen elinkaaressa on monta vaihetta, jotka
ovat mahdollisia maalitauluja antiviraalisille lääkkeille.
On kuitenkin selvinnyt, että tähän mennessä
parhaimpia viraalisten entsyymien maalitauluja on kaksi: "käänteistranskriptaasi"
(RT) ja "proteaasi". Ensimmäinen lääke
oli AZT, niin sanottu RT-inhibiittori. Se kehitettiin vuonna
1986. Ensimmäinen proteaasi-inhibiittori (PI) tuli markkinoille
vuonna 1996. PI-lääkkeet ovat erittäin tehokkaita,
mutta niillä on myös vakavia sivuvaikutuksia. Kaikki
tänä päivänä käytössä
olevat HI-viruksen vastalääkkeet estävät
kuitenkin näitä kahta viraalista entsyymiä,
molemmat tosin eri tavalla. Yritykset muiden viraalisten entsyymien
tai tärkeiden rakenteiden torjumiseksi (esim. reseptorimolekyylien,
joita virus tarvitsee tunnistaakseen maalitaulusolunsa) vaativat
intensiivistä tutkimustyötä.
Viruspitoisuuden mittaus
Viruspitoisuuden mittauksella tarkoitetaan suoraa HI-viruksen
määrän laskemista potilaan veressä. Tarkemmin
sanottuna mitataan HIV-RANA-kopioiden määrä
veriplasmamillilitrasta. Käytetyt metodit perustuvat
joko pääasiassa nukleiinihapon suoraan lisääntymiseen
(esim. näytteen RNA-kopioiden voimakas ja tarkkaan määritelty
lisääntyminen, pääasiassa PCR:llä)
tai mitatun signaalin voimakkaaseen lisääntymiseen
(haarautunut DNA-analyysi, bDNA). Tällä hetkellä
alempi havaitsemisraja on 5-20 viruskopiota per plasmamillilitra,
käytettävästä metodista riippuen. Nämä
ovat melko alhaisia lukuja verrattuna yli 30 000 viruskopioon
plasmamillilitrasta, jota pidettäisiin korkeana viruspitoisuutena.
Ylempi havaitsemisraja on noin 10 miljoonaa kopiota per verimillilitra.
Viruspitoisuus on erittäin luotettava markkeri tartunnan
kehityksessä ja nykyään myös tärkein
indikaattori antiretrovirushoidon tehokkuudesta tai tämänhetkisen
terapian muutostarpeista. Hoidon päämääränä
on mahdollisimman alhainen viruspitoisuus, parhaiten "ei-havaittavissa
oleva" raja potilaan veren viruskopioista.
T-solujen määrä tai CD4-solujen määrä
T4- tai CD4-solut ovat erikoislaatuisia valkoisten verisolujen
muotoja, joilla on tärkeä ja keskeinen rooli ihmiskehon
immuunijärjestelmässä. Ne ovat valitettavasti
HI-viruksen suosituimpia isäntäsoluja, jotka hyökkäävät
isäntäsoluihin ja tuhoavat ne. Terveellä yksilöllä
on noin 800 - 1 500 CD4-solua per verimillilitra. Jos verimillilitrassa
on alle 200 CD4-solua, immuunijärjestelmän puolustuksesta
tulee epätäydellinen.
Yhdistettynä viruspitoisuuteen CD4-solujen määrä
on luotettava indikaattori potilaan tilasta. CD4-solut lasketaan
suoraan verinäytteestä "laservuotosytometria"-menetelmän
avulla. Monoklonaalisten vasta-aineiden yhdistymisen kautta
(vasta-aineet tunnistavat näiden solujen tietyt pintarakenteet)
CD4-solut varustautuvat tietyillä fluoresenssimikroskopian
markkereilla. Näin on mahdollista erottaa nämä
solut kaikista muista näytteen soluista ja laskea niiden
määrä samalla kun ne kulkevat ilmaisimen läpi.
siittiösolujen "peseminen"
HIV-positiivisen miehen siemenneste saattaa sisältää
suuren määrän viruksia myös antiretrovirushoidon
aikana. Virukset eivät yleensä onneksi takerru eläviin
siittiösoluihin (joita tarvitaan hedelmöitykseen),
vaan ne ovat yleensä nesteessä yhdistyneenä
kuolleisiin siittiösoluihin ja joihinkin muihin siemennesteen
soluihin. Siksi on haluttaessa mahdollista erottaa elävät
siittiösolut vapaista viruksista ja tartunnan saaneet
solut voidaan erottaa niin sanotusti "pesemällä".
"Pesu" sisältää tiheän gradienttisentrifugoinnin
kolme vaihetta.
Myöhemmin pestyjen siittiösolujen näyte tutkitaan
huolellisesti viruksen nukleiinihaposta käyttäen
herkkää tunnistusmenetelmää kuten PCR:ää.
Toimenpiteen aikana jäljelle jääneet siitiösolut
varastoidaan kryosäilytykseen, jotta ne voidaan
pitää elossa. Kun pystytään todistamaan,
että ne eivät sisällä viruksia (eli niistä
ei ole löytynyt minkäänlaisia viitteitä
DNA-viruksesta tai RNA:sta), siittiösoluja käytetään
keinohedelmöitykseen tai, jos välttämätöntä,
IVF:ssä.
Mikä
on geeni?
Mikä
on kromosomi?
Mikä
on DNA?
Mikä
on proteiini?
Mitä
mitoosilla ja meioosilla tarkoitetaan?
Mitä
perimällä tarkoitetaan?
Geneettinen
testaus taudinhaussa
Miten
ihmisalkio kloonataan sairauksien parantamistarkoituksiin?
Kuinka
alkiosta saadaan kantasoluja?
Kuinka
hyönteisiä vastustava tomaattiköynnös
tehdään
|